Диссертация - Участие многофункционального белка YB-1 в регуляции Р-гликопротеина и в ответе клетки на стресс
Содержание
Оглавление
Введение...6
I. Обзор литературы...и
*¦ 1.1. Мулътифункционалъный белок YB-1...11
/././. Структура YB-1...11
1.1.2. Функции YB-1...12
1.1.3. YB-1 и пролиферация клеток...16
1.1.4. Активация YB-1 при стрессе...19
1.2. Множественная лекарственная устойчивость опухолевых клеток...20
1.2.1. Лекарственная устойчивость, обусловленная снижением накопления
препарата внутри клетки...22
1.2.1.1. Множественная лекарственная устойчивость, обусловленная • Р-гликопротеином...22
i 1.2.1.2. Множественная лекарственная устойчивость, определяемая
v
белками семейства MRP...-...27
1.2.1.3. Множественная лекарственная устойчивость и белок BCRP...28
1.2.1.4. Множественная лекарственная устойчивость, определяемая
белком LRP...29
1.3. Роль белка YB-1 в регуляции множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток...30
1.3.1. Экспрессия и внутриклеточная локализация YB-1 в культурах
опухолевых клеток, резистентных к химиопрепаратам...30
1.3.2. Исследование участия YB-1 в регуляции генов и белков МЛУ...32
1.3.3. Исследование взаимосвязи между уровнем экспрессии
и внутриклеточной локализацией белка YB-1 с экспрессией белка Pgp
4.
и прогнозом лечения больных...34
П. Материалы и методы...37
11.1. Линии клеток, использованные в работе...37
11.2. Препапаты, использованные в работе...37
ИЗ. Выделение РНК и ОТ-ПЦР...37
11.4. Иммуноцитохимическое определение экспрессии YB-1 и белков МЛУ...38
11.5. Иммуноцитохимическое определение внутриклеточной локализации
YB-1 и окраска клеток на белки МЛУ...38
11.6. Иммунологический анализ клеточных лизатов (Western-blot анализ)...40
11.7. Трансфекция клетокКВЗ-1 иНСТ116кДНК YB-1...41
11.8. Синтез и трансфекция siRNA/YB-1...41
//.9. Определение чувствительности клеток к цитостатикам...41
III. Результаты...42
///./. Исследование экспрессии и локализации белка YB-1 в культивируемых линиях чувствительных и резистентных к лекарственным препаратам
опухолевых клеток...42
111.1. 1. Модели исследования...42
III. 1.2. Анализ уровня экспрессии мРНК/белка YB-1 в клетках с разными
уровнями лекарственной устойчивости...44
III. 1.3. Исследование локализации белка YB-1 в парах чувствительных
и резистентных опухолевых клеток...46
III. 1.4. Сопоставление уровня экспрессии и локализации белка YB-1 в парах чувствительных и резистентных опухолевых клеток с экспрессией
генов/белков МЛУ...49
III. 1.4.1. Анализ уровня экспрессии MDRl/Pgp...49
3
III.1.4.2. Определение уровня экспрессии генов/белков MRP 1, BCRP, LRP...50
III.2. Влияние повышения экспрессии YB-1 на экспрессию генов/белков МЛУ и лекарственную устойчивость опухолевых клеток...55
111.2.1. Исследование влияния транзиторного введения YB-1
на лекарственную устойчивость опухолевых клеток...55
111.2.2. Исследование влияния транзиторного введения YB-1 на экспрессию
Pgp в условиях действия цитостатиков...57
Ш.2.3. Анализ влияния стабильной гиперэкспрессии YB-1 на экспрессию генов/белков МЛУ...58
III. 2.4. Определение скорости пролиферации клонов клеток
с гиперэкспрессией YB-1...62
Ш.З. Влияние подавления экпрессии YB-1 на экспрессию генов/белков
МЛУ(эффекты siRNA/YB-1)...63
III.3.I. Подавление экспрессии эндогенного YB-1 и экспрессия генов МЛУ...63
Ш.З.2. Влияние подавления эндогенного YB-1 на пролиферацию клеток...63
111.4. Влияние химиотерапевтических препаратов на локализацию YB-1
в клетках и на экспрессию генов МЛУ...65
III.4.1. Влияние препаратов на локализацию YB-1 в клетках...65
Ш.4.2. Активация экспрессии генов МЛУ под действием цитостатиков...68
111.5. Определение уровня экспрессии мРНК YB-1 и белков МЛУ
у больных острым нелимфобластным лейкозом (ОНЛЛ)...70
IV. Обсуждение...72
V. Выводы...83
VI. Список литературы...84
