Диссертация - Механизмы фагоцитоза и его роль при формировании резистентности организма к возбудителям чумы, псевдотуберкулеза и туляремии
Содержание
ОГЛАВЛЕНИЕ
Стр.
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ... 7
ВВЕДЕНИЕ... 9
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ... 17
1.1. Современные представления о механизмах фагоцитоза и его роли в формировании резистентности организма к бактериальным патогенам ...
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ... 53
2.1. Экспериментальные животные... 53
2.2. Штаммы бактерий и бактериальные антигены... 53
2.3. Питательные среды... 54
2.4. Получение чумного микроба в L-форме... 55
2.5. Способы контроля антигенного состава бактерий... 55
2.5.1. Определение наличия и локализации бактериальных антигенов с помощью иммуноферментного метода...
2.5.2. Реакция двойной радиальной иммунодиффузии... 57
2.5.3. Выявление антигенов с помощью антител, меченных коллоидным золотом...
2.6. Получение сывороток... 58
2.7. Получение бактериальных антигенов... 58
2.7.1. Изоляция капсульного антигена чумного микроба из культу- <.% ральной жидкости осаждением сульфатом аммония...
2.7.2. Получение капсульного антигена из культуральной жидко- ^Q сти методом изоэлектрической преципитации...
2.7.3. Выделение капсульного антигена из культуральной жидко- ,-сти гель-хроматографией...
2.7.4. Получение фракции II чумного микроба... 60
2.8. Получение макрофагов и полиморфноядерных лейкоцитов... 61
2.8.1. Получение резидентных перитонеальных макрофагов... 61
2.8.2. Получение альвеолярных макрофагов... 62
2.8.3. Получение полиморфноядерных лейкоцитов... 62
2.9. Выделение лизосом из перитонеальных макрофагов и поли- „ морфноядерных лейкоцитов...
2.10. Определение хемотаксической и адгезивной активности мак- (-рофагов...
2.10.1. Определение хемотаксической способности макрофагов ... 64
2.10.2. Определение адгезивной способности макрофагов... 64
2.11. Определение фагоцитарной активности макрофагов... 65
2.12. Определение частоты слияния фагосом с лизосомами... 66
2.13. Определение ферментативной активности фагоцитов... 66
2.13.1. Определение активности лизосомальных ферментов... 66
2.13.1.1. Определение активности лизоцима... 66
2.13.1.2. Определение активности катепсина Д... 67
2.13.1.3. Определение активности кислой фосфатазы... 67
2.14. Определение метаболитов кислорода в фагоцитах... 68
2.14.1. С помощью НСТ-теста... 68
2.14.2. С помощью хемилюминесцентного метода... 69
2.15. Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы... 70
2.16. Определение активности НАДФН-оксидазы... 70
2.17. Определение активности миелопероксидазы... 71
2.18. Определение активности супероксиддисмутазы... 72
2.19. Определение содержания неферментных катионных белков ... 73
2.20. Определение активности NO-синтазы... 73
2.21. Определение антителопродуцирующих клеток... 73
2.22. Электронная микроскопия... 74
2.23. Получение цитокинов... 75
2.24. Методы выявления цитокинов... 75
2.25. Другие методы... 76
ГЛАВА 3. МЕХАНИЗМЫ ФАГОЦИТОЗА YERSINIA PESTIS РАЗНЫХ
ФЕНОТИПИЧЕСКИХ ФОРМ... 77
3.1. Функциональная активность макрофагов и полиморфно-ядерных лейкоцитов чувствительного животного при взаимодействии с чумным микробом...
3.1.1. Хемотаксические свойства фагоцитов... 78
3.1.2. Адгезивные свойства фагоцитов... 80
3.1.3. Показатели фагоцитарной активности и завершенности фа- „ гоцитоза...
3.1.4. Состояние бактерицидных систем фагоцитов при контакте с чумным микробом...
3.1.4.1. Показатели активации фагоцитов по их хемилюминес- » ценции ...
3.1.4.2. Интенсивность кислородзависимого метаболизма... 93
3.1.4.3. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы фагоцитов...
3.1.4.4. Активность НАДФН-оксидазы фагоцитов... 98
3.1.4.5. Активность миелопероксидазы фагоцитов... 101
3.1.4.6. Содержание в фагоцитах неферментных катионных белков... 1U
3.1.4.7. Продукция макрофагами монооксида азота... 103
3.2. Активность лизосомальных ферментов фагоцитов... 104
3.3. Влияние фракции I и «мышиного» токсина чумного микроба на функциональное состояние фагоцитов...
3.3.1. Влияние фракции I на состояние окислительного метаболизма фагоцитов...
3.3.2. Влияние фракции I на глюкозо-6-фосфатдегидрогеназную активность макрофагов и ПЯЛ...
3.3.3. Влияние фракции I на активность НАДФ-Н-оксидазы фаго- 1.~ цитов...;...
3.3.4. Влияние фракции I чумного микроба на активность миело- . пероксидазы и содержание неферментных катионных белков...
3.3.5. Влияние «мышиного» токсина чумного микроба на бактери- _ цидные системы фагоцитов в эксперименте...
3.3.6. Активность лизосомальных ферментов макрофагов и поли-морфноядерных лейкоцитов под влиянием фракции I и «мышиного» ^ токсина Y. pestis EV...
3.3.7. Влияние фракции I и некоторых других антигенов чумного _.„ микроба на синтез фагоцитами окиси азота...
3.3.8. Влияние Y. pestis EV, фракции I и ЛПС чумного микроба на 1 _„
цитокининдуцирующую активность фагоцитов...
ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ МЕХАНИЗМОВ ФАГОЦИТИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ МОНО- И ПОЛИНУКЛЕАРНЫХ ФАГОЦИТОВ МОРСКОЙ СВИНКИ ПРИ ВЗАИМОДЕЙСТВИИ С YERSINIA PSEUDOTUBER-CULOSIS..."... 123
4.1. Фагоцитарная активность макрофагов и полиморфноядерных лейкоцитов экспериментальных животных при взаимодействии с Y. pseudotuberculosis. Особенности фагоцитоза Y. pseudotuberculosis с разным набором плазмид... 123
4.1.1. Хемотаксические и адгезивные свойства фагоцитов при ._„ взаимодействии с псевдотуберкулезным микробом
4.1.1.1. Хемотаксические свойства фагоцитов под влиянием .^. Y. seudotuberculosis...
4.1.1.2. Адгезивные свойства фагоцитов под влиянием .„ Y. pseudotuberculosis...
4.1.2. Показатели фагоцитарной активности и завершенности фа- ^ _ гоцитоза ...
4.1.3. Показатели частоты слияния фагосом с лизосомами при , ~ 1 взаимодействии фагоцитов с псевдотуберкулезным микробом...
4.2. Бактерицидные системы фагоцитов при взаимодействии с псевдотуберкулезным микробом...;...
4.2.1. Показатели активации фагоцитов по реакции восстановления нитросинего тетразолия...
4.2.2. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы..., 134
4.2.3. Активность НАДФН-оксидазы ... 136
4.2.4. Активность супероксиддисмутазы... 137
4.2.5. Активность миелопероксидазы... 138
4.2.6. Содержание неферментных катионных белков... 139
ГЛАВА 5. ЗАКОНОМЕРНОСТИ И МЕХАНИЗМЫ ФАГОЦИТОЗА FRANCISELLA TULARENSIS IN VITRO И В ДИНАМИКЕ ИНФЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА...
5.1. Закономерности фагоцитоза при взаимодействии макрофагов и полиморфноядерных лейкоцитов экспериментальных животных с клетками F. tularensis... 142
5.1.1. Хемотаксические свойства фагоцитов... 142
5.1.2. Адгезивные свойства фагоцитов...-... 142
5.1.3. Фагоцитарная активность макрофагов и завершенность фагоцитоза ... 143
5.1.4. Показатели активации фагоцитов по реакции восстановления нитросинего тетразолия... 146
5.1.5. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и НАДФН-оксидазы ... 147
5.1.6 Активность миелопероксидазы и содержание неферментных катионных белков... 148
5.1.7. Активность лизосомальных ферментов... 148
5.1.8. Глобулинпродуцирующая активность фагоцитов... . „
5.2. Механизмы фагоцитоза F. tularensis в динамике инфекционного процесса... 151
5.2.1. Хемотаксическая и адгезивная активность фагоцитов... 151
5.2.2. Фагоцитарная активность макрофагов морской свинки... 153
5.2.3. Показатели активации фагоцитов по реакции восстановления нитросинего тетразолия... 156
5.2.4. Показатели хемилюминесцентного ответа фагоцитов... 157
5.2.5. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, НАДФН-оксидазы, миелопероксидазы и содержание неферментных катионных белков... 159
5.2.6. Изучение ультраструктуры фагоцитов при взаимодействии с туляремийным микробом... 160
ГЛАВА 6. РАЗРАБОТКА ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИ ОБОСНОВАННЫХ ПРИНЦИПОВ КОРРЕКЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ СИСТЕМЫ МОНОНУКЛЕРНЫХ ФАГОЦИТОВ ПРИ ВЗАИМОДЕЙСТВИИ С ПАТОГЕННЫМИ МИКРООРГАНИЗМАМИ... 168
6.1. Влияние арабиногалактана и феррогала на фагоцитарную ак-вность и бактерицидные свойства перитонеальных макрофагов мор-
эй свинки...
6.1.1. Влияние арабиногалактана и феррогала на хемотаксические
171 и адгезивные свойства макрофагов...
6.1.2. Влияние арабиногалактана и феррогала на фагоцитарную активность и завершенность фагоцитоза...
6.1.3. Влияние арабиногалактана на кислородзависимый метаболизм перитонеальных макрофагов морской свинки...
6.1.4. Влияние арабиногалактана и феррогала на активность НАДФ-Н-оксидазы...
6.1.5. Влияние арабиногалактана и феррогала на активность су-пероксиддисмутазы...
6.1.6. Влияние арабиногалактана и феррогала на синтез окиси азо-та фагоцитами морской свинки...
6.2. Цитокининдуцирующая активность живой чумной вакцины под _„ влиянием арабиногалактана и феррогала...
6.3. Влияние арабиногалактана и феррогала на протективную ак-
тивность живой чумной вакцины...
ЗАКЛЮЧЕНИЕ... 189
ВЫВОДЫ... 218
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ... 220
