Диссертация - Новые методы исследования ДНК—Белковый взаимодействий с помощью противоопухолевый антибиотиков
Содержание
10 Список сокращений
ГЛАВА I. СУЩЕСТВУЮЩИЕ МЕТОДИКИ ОТБОРА ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ СРЕДСТВ. **.
1.1. Методики первичного отбора противоопухолевых препаратов
на плотных опухолях * *
1.2. Отбор противоопухолевых веществ в опытах на культуре опухолевых клеток in Vitro
1.3. Исследование активности на неопухолевых объектах ГЛАВА И. МЕХАНИЗМЫ РАСЩЕПЛЕНИЯ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ КОМПЛЕКСАМИ,
СОДЕРЖАЩИМИ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ АНТИБИОТИКИ
2.1. История исследований расщепления нуклеиновых кислот
2.2. Расщепление ДНК блеомицином _Q
2.2.1. Комплексы блеоиицина с металлами рА
2.2.2. Комплексы блеомицина с Fe(II) O(-
2.2.3. Предполагаемый механизм образования продуктов
расщепления ДНК блеомицином о/?
2.3. Расщепление ДНК 1-10 фенантролином 2.3.1. Роль Clf и
33
2.3.2. Модель присоединения комплекса 1-10 фенантролин-
-CU+ к ДНК «о
2.3.3. Продукты реакции о« 2.4. Расщепление ДНК в присутствии других противоопухолевых антибиотиков оо
2.4.1. Метидиупропил-ЭДТА оо
2.4.2. Облучение гелий-неоновым лазером 40
- 3 -
Стр.
2.4.3. Адрианицин ._,
40
2.4.4. Митомицин С ^1
2.4.5. Неокарциностатин до ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ КОВАЛЕНТНЫХ-ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ БЕЛКОВ С ДНК
В ПРИСУТСТВИИ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ АНТИБИОТИКОВ . 44 II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНА Я ЧАСТЬ
ГЛАВА 4. . МАТЕРИАЛЫ, ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 51
¦ 4.1. ВЫДЕЛЕНИЕ ЯДЕР. „
4.1.1. Выделения ядер из эритроцитов кур со
4.1.2. Выделение ядер из клеток асцитной карциномы
Эрлиха... с-.
4.1.3. Выделения ядер из печени и тинуса телят гг
4.2. ВЫДЕЛЕНИЕ ОСНОВНЫХ БЕЛКОВ ХРОМАТИНА
4.3. ЗАВИСИМОСТЬ СВЯЗЫВАНИЯ ДНК, РНК И БЕЛКОВ ХРОМАТИНА С РАЗЛИЧНЫМ КОЛИЧЕСТВОМ ОКСИАПАТИТА
4.4. ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ БЕЛКОВ ХРОМАТИНА НА ОКСИАПАТИТЕ 5?
4.5. КОВАЛЕНТНАЯ СЙИВКА.ГИСТОНОВ С ДНК, ИНДУЦИРОВАННАЯ ПРИ ПОМОЩИ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ АНТИБИОТИКОВ IN VITRO
И IN VIVO 60
4.5.1. Общие закономерности сшивки белков с ДНК в .
присутствии противоопухолевых антибиотиков сп
¦4:5.2. Сшивка с помощью системы 1,5 тМОР/0,15 mMGuSO ^
ютмн2о2. .,...: 61
4.5.3. Сшивка с помощью системы 100 М BLM/100 MFe(III)/
¦•¦;•¦'..¦-1 тЛ°2 • •¦: :.:¦ . 62
.4.5.4. Сшивка с помощью системы 2,5 ШМ CU(II)/25 mM AsA/
63
4.5.5. Сшивка с помощью систем 10 ШМ Fe(II)/l mM H^O^ и «„
- 4 -
:¦¦-¦ СтР-
10 mM Fe(III)/lmM НгО2 63
4.5.6. Пришивка с помощью гелий-неонового лазера 54
4.6. ВОССТАНОВЛЕНИЕ ПРИШИТОГО. КОМПЛЕКСА 65
4.7. ОБОГАЩЕНИЕ И ОЧИСТКА ДНК-БЕЛКОВЫХ КОМПЛЕКСОВ 66
4.7.1. Депротеинизация в градиенте плотности CsCl 66
4.7.2. Удаление непришитых белков с помощью цетавлона S7
4.7.3. Удаление непришитой ДНК с помощью экстракции смесью фенол-хлороформ 67
4.8. РАЗДЕЛЕНИЕ СШИТЫХ КОМПЛЕКСОВ С ПОМОЩЬЮ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА
4.8.1. Двумерный аналитический электрофорез по Лэммли 69
4.8.2. Электрофорез ДНК в денатурирующих условиях 70
4.8.3. ДНП - электрофорез 71
4.8.4. Белковый электрофорез в присутствии тритона DF-16 71
4.9. ЭЛЕКТРОПЕРЕНОС ФРАГМЕНТОВ ДНК НА МЕМБРАНЫ 72
4.10. БЛОТГИБРИДИЗАЦИЯ СШИТЫХ КОМПЛЕКСОВ С АНТИТЕЛАМИ
к BrdU, меченными 12^ 73
ГЛАВА 5. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
5.1. РАЗРАБОТКА МЕТОДИЧЕСКИХ ПОДХОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ 75
5.2. КОВАЛЕНТНОЕ СВЯЗЫВАНИЕ БЕЛКОВ С ДНК С ПОМОЩЬЮ 81 СИСТЕМ. СОДЕРЖАЩИХ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ АНТИБИОТИКИ
5.3. ПРИШИВКА БЕЛКОВ К ДНК С ПОМОЩЬЮ СИСТЕМЫ 1-10 ФЕНАНТР0ЛИН/С1?О4/Н2О2 IN VIVO И ДРУГИХ СИСТЕМ go,
5.4. ИССЛЕДОВАНИЕ НАКОПЛЕНИЯ ДНК-БЕЛКОВЫХ СШИВОК ПРИ СТАРЕНИИ С ПОМОЩЬЮ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ ОСНОВНЫХ -БЕЛКОВ ХРОМАТИНА НА ОКСИАПАТИТЕ 97
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
